Влияние кадмия на показатели азотного и углеводного обмена в организме крыс разного возраста часть 2

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора научной литературы, материалов и методов исследований, результатов экспериментальных исследований, обобщение результатов исследований, заключения, списка использованных источников, включающий 308 наименований, из которых 135 латиницей, 8 приложений. Работа изложена на 186 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 28 таблицами и 2 рисунками. Основное содержание работы Материалы и методы исследований. Исследования проводились на самцах крыс линии Вистар, которые содержались на стандартном рационе. Опыты проведены на крысах трех возрастных групп: 3-месячного возраста (период полового созревания, молодые), 6-месячного возраста (период половой зрелости; взрослые) и 18-месячного возраста (период старости, старые) (Трахтенберг И. М. и др ., 1994). Отравление кадмия сульфатом (в дальнейшем кадмий) проводилось путем ежедневного внутрибрюшного введения кадмия сульфата в 0,89% растворе натрия хлорида из расчета 0,134 мг / 100 г массы тела животного, составляет 1/50 LD50 (Филова В. А. и др., 1988; Трахтенберг И. М. и др., 1994). Интактным животным внутрибрюшинно вводился соответствующий объем 0,89% раствора натрия хлорида. Опыт длился 14 суток. Животных декапитировали под эфирным наркозом на 15 сутки от начала опыта. Опытные животные были разделены на 2 группы: I — интактные крысы; II — крысы, которым вводили кадмия сульфат (в дальнейшем крысы, отравленные кадмия сульфатом). Проведено 3 серии опытов. Первую серию проведены на крысах 3-месячного возраста; вторую — на крысах 6-месячного возраста; третью — на крысах 18-месячного возраста. Материалом для исследования послужили кровь и внутренние органы: печень, почки, селезенка, легкие, сердце. Определяли качественные и количественные характеристики свободных аминокислот в крови и внутренних органах, а также концентрацию показателей азотного обмена и содержание метаболитов цикла трикарбоновых кислот и гликолиза — в крови и печени крыс всех исследуемых групп.
Седат Игдеджи

Для исследования качественных и количественных характеристик свободных аминокислот брали образцы крови, печени, почек, селезенки, легких, сердца; концентрации показателей азотного обмена — аммиака, креатинина, мочевины и общего белка — в крови; содержания метаболитов гликолиза — лактата, пирувата, цикла трикарбоновых кислот — оксалоацетата, малата, б-кетоглутарата проводили в печени и крови крыс всех исследуемых групп. Концентрацию глюкозы, мочевины, общего белка и креатинина в крови определяли с помощью биохимического анализатора Microlab — 200 (Нидерланды). Исследования проводились по методикам, определенным инструкцией, с использованием стандартных наборов реагентов фирмы «Human» (Украина). Концентрацию аммиака в крови исследовали методом Силаков (Силакова Г. И., 1969). Определение качественных и количественных характеристик свободных аминокислот в образцах крови и внутренних органов проводилось методом жидкостной ионообменной хроматографии на аминокислотному анализаторе ААА Т-339 М фирмы «Микротехна» (Чехия) (Овчинников Ю. А., 1974; Козаренко Т. Д., 1975) . Содержание метаболитов цикла трикарбоновых кислот и гликолиза определяли в крови и печени методами ферментативного анализа (Асатиани В. С., 1969). Результаты исследований подлежали статистическому анализу. Достоверность полученных результатов определяли по критерию Стьюдента (Кучеренко М. Е. и др., 2001). Изменения считались достоверными при Р <0,05. Для расчетов использовалась компґютерна программа Exсel (Microsoft, USA). РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Интенсивность азотного обмена имеет выраженную возрастную зависимость и определяется прежде всего физиологическим состоянием организма и нейрогуморальными факторами ( Oldam JD, 1983). Метаболизм аминокислот зависит от ряда факторов - как эндогенных (возраст, нейрогуморальный статус, функционирование ферментных систем), так и экзогенных (экологическая ситуация, рацион и др) (Западнюк В. И. и др., 1982). Изучение закономерностей обмена аминокислот на определенном этапе онтогенеза является необходимым условием для правильного выбора диагностических и терапевтических мероприятий по устранению патологических процессов, характерных для определенного возрастного периода. Исследование пула свободных аминокислот в крови является отражением интенсивности обмена белков и аминокислот, а также их изменений под влиянием различных факторов, в том числе соединений тяжелых металлов. В крови крыс всех исследовательских групп обнаружено 18 аминокислот: аланин, аргинин, аспарагиновая кислота, валин, гистидин, глицин, глутаминовая кислота, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, пролин, серин, тирозин, треонин, триптофан , фенилаланин, цистин. В результате проведенных исследований, приведенные в табл.1, выявлены различия в количественном составе свободных аминокислот в крови крыс как в зависимости от возраста, так и в условиях введения кадмия сульфата. Сравнительный анализ концентрации свободных аминокислот в крови крыс 3, шестой 18-месячного возраста свидетельствует о постепенном уменьшении с возрастом метаболического пула свободных аминокислот. Так, в крови животных 3-месячного возраста отмечено наивысшую концентрацию свободных аминокислот, которая составляет 330,25 мкг / мл. Такой характер количественных изменений аминокислотного состава крови у крыс 6 - и 18-месячного возраста, возможно, связан с повышенной деструкцией белковых молекул в условиях усиления катаболизма, угнетением интенсивности процессов биосинтеза белка и снижением активности ферментных систем, участвующих в обмене аминокислот. Результаты проведенных исследований согласуются с данными других авторов, которые показали, что у старых животных концентрация аминокислот снижается, а интенсивность метаболизма аминокислот зависит от возраста (Богданова Е. В., Толкачева М., 1968; Agrawal HC et al., 1968) . Установлено, что в крови крыс 3, шестой 18-месячного возраста в условиях введения кадмия снижается общая концентрация свободных аминокислот относительно соответствующих показателей в крови животных интактных групп (табл.1). При этом в условиях введения кадмия сульфата в крови крыс всех возрастных групп повышается концентрация аспарагиновой и глутаминовой кислот, изолейцина, лизина в отношении этих показателей в крови интактных животных. Известно, что глутамин в организме является резервной и транспортной формой аммиака, и повышение его концентрации в крови, очевидно, является свидетельством усиления глутаминсинтетичнои функции печени отравленных крыс (Кричевский А. А. и др., 1983). Показано, что в условиях кадмиевой интоксикации в крови крыс всех исследуемых групп снижается концентрация аланина, аргинина, валина, гистидина, лейцина, метионина, пролина, серина, тирозина, треонина, триптофана и цистина сравнению с этими показателями в крови крыс интактных групп. Таблица 1. Концентрация свободных аминокислот в крови крыс 3, шестой 18-месячного возраста в условиях отравления кадмия сульфатом, мкг / мл (M m, n = 8)

Показатели Группы животных
3 месяца 6 месяцев 18 месяцев
интактные крысы крысы, отравленные кадмия сульфатом интактные крысы крысы , отравленные кадмия сульфатом интактные крысы крысы, отравленные кадмия сульфатом
Аланин 24,46 2,07 14,65 1, 50 * 16,27 0,80 * 20 , 19 1 , 19 15,71 0,94 *
Аргинин 24,15 1,27 19,47 0,92 * 20,05 1,08 18,02 1 , 07
Аспарагиновая кислота 5,07 0 21 5,96 0, 19 * 5,09 1,63 5,84 0,37 4,55 0,28 5,07 0,48
Валин 17,88 1,08 12,36 0,80 * 11,06 0,13 8,54 0,53 *
Гистидин 13,84 1,21 7,90 0,51 * 8,41 0,12 6,14 0,46 *
Глицин 26,93 2,08 23,22 1,76 22,73 1,70 19,54 1,67 21,18 1,64 19,50 1,33
Глутаминовая кислота 24,46 1,86 36,12 3,41 * 17,33 1,34 25,85 2,45 * 12,82 0,83 18,02 1,93 *
изолейцин 12 11 0,73 14,36 0,64 * 6,78 0,11 7,19 0,30
лейцин 17,36 0,94 11 81 0,84 * 14,31 0,14 12,01 0,61 *
Лизин 31,60 2,89 33,87 2,16 17,98 0,80 18,55 1,13
Метионин 4,80 0,12 2,50 0,17 * 3,43 0,24 2,87 0, 19 *
Пролин 28,97 2, 39 22,09 0,11 * 24,42 1,21 20,16 0,54 * 21,33 1,04 18,03 0,48 *
Серин 35,01 2,71 20,48 1,74 * 32,30 2,26 22,16 1,40 * 31,64 2,53 23,23 1,31 *
тирозин 9,78 0,16 5,31 0,41 * 7,17 0,22 5,44 0,40 *
Треонин 18,26 1,53 13,19 0,81 * 18,42 0,91 14,83 0,86 * 17 , 47 1,47 14,98 1,18
Триптофан 22,17 1,26 18,14 0,68 * 18,73 1,34 16,68 1,50
Фенилаланин 8,62 0,67 8,02 0,36 6,37 0,14 6,11 0,52
Цистин 4,78 0,10 2 , 31 0,18 * 3,78 0,17 2,87 0,21 *
В аминокислот 330,25 16,32 271,76 13,28 * 246,00 10,80 * 247,25 18,23 218,96 15,47